在細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查中以光學(xué)顯微鏡為常用,借助顯微鏡顯微放大后可以觀察到細(xì)菌的一般形態(tài)和結(jié)構(gòu)。檢查細(xì)菌常用的顯微鏡有以下4種:
1.生物顯微鏡:普通生物顯微鏡通常以自然光或燈光為光源,其波長(zhǎng)約0.5μm。在最佳條件下,顯微鏡的最大分辨率為波長(zhǎng)的一半,即0.25μm,而肉眼所能看到的最小形象為0.2mm,故在普通光學(xué)顯微鏡下用油鏡放大1000倍,可將0.25μm的微粒放大到0.25mm,肉眼便可以看清,一般細(xì)菌大0.25μm,故用普通生物顯微鏡均能清楚看到。
2.暗視野顯微鏡:暗視野顯微鏡是用特制的暗視野集光器代替普通光學(xué)顯微鏡上的明視野集光器,由于暗視野集光器的中央為不透光的遮光板,光線不能直接射入鏡筒,故背景視野黑暗無(wú)光,而從集光器四周邊緣斜射到標(biāo)本部位的光線,經(jīng)菌體散射后而進(jìn)入物鏡。故在強(qiáng)光的照射下,可以在黑暗的背景中看到發(fā)亮的菌體,猶如夜空中的明亮星星。明暗反差提高了觀察的效果,多用于檢查不染色的活細(xì)菌和螺旋體的形態(tài)及運(yùn)動(dòng)觀察。
3.相差顯微鏡:在進(jìn)行未染色標(biāo)本檢查時(shí),由于細(xì)菌的折旋光性與周圍環(huán)境的折旋光性相近,明暗對(duì)比不明顯。在普通光學(xué)顯微鏡下不易看清,用暗視野顯微鏡只能看到發(fā)亮的菌體輪廓,看不清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。而相差顯微鏡依據(jù)光波穿過(guò)標(biāo)本中密度不同的部位時(shí),引起光相差異的原理,利用相差板的光柵作用,改變直射光的光相和振幅,將光相的差異轉(zhuǎn)換成光的強(qiáng)度的差異,使細(xì)菌中的某部分結(jié)構(gòu)比其他部分深暗,襯托出鮮明的對(duì)比。本法主要用于檢查不染色活細(xì)菌的形態(tài)及某些內(nèi)部結(jié)構(gòu)。
4.熒光顯微鏡|顯微鏡攝像頭|顯微鏡接口:熒光顯微鏡|顯微鏡攝像頭|顯微鏡接口以紫外光或藍(lán)紫光為光源,能激發(fā)熒光物質(zhì)發(fā)光使之成為可見(jiàn)光。細(xì)菌經(jīng)熒光色素染色后,置于熒光顯微鏡|顯微鏡攝像頭|顯微鏡接口下,即可激發(fā)熒光,因此在暗色的背景下可以看到發(fā)射熒光的細(xì)菌。由于紫外光與藍(lán)紫光的波長(zhǎng)較短(0.3~0.4μm),故分辨率得到進(jìn)一步提高。熒光顯微鏡|顯微鏡攝像頭|顯微鏡接口還廣泛應(yīng)用于免疫熒光技術(shù)中。