顯微鏡物鏡
物鏡(objective)安裝在鏡筒下端的轉(zhuǎn)換器上,因接近被觀察的物體,故又稱接物鏡。其作用是將物體作第一次放大,是決定成像質(zhì)量和分辨能力的重要部件。物鏡上通常標(biāo)有數(shù)值孔徑、放大倍數(shù)、鏡筒長度、焦距等主要參數(shù)。如:NA 0.30;10×;160/0.17;16㎜。其中“NA 0.30”表示數(shù)值孔徑(numerical aperture,簡寫為NA),“10×”表示放大倍數(shù),“160/0.17”分別表示鏡筒長度和所需蓋玻片厚度(㎜),“16㎜”表示焦距。
(一)、物鏡
物鏡是決定顯微鏡性能的最重要部件,安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上,接近被觀察的物體,故叫做物鏡或接物鏡。
1、物鏡的分類
物鏡根據(jù)使用條件的不同可分為干燥物鏡和浸液物鏡;其中浸液物鏡又可分為水浸物鏡和油浸物鏡(常用放大倍數(shù)為90—100倍)。
根據(jù)放大倍數(shù)的不同可分為 低倍物鏡(10倍以下)、中倍物鏡(20倍左右)高倍物鏡(40—65倍)。
根據(jù)像差矯正情況,分為消色差物鏡(常用,能矯正光譜中兩種色光的色差的物鏡)和復(fù)色差物鏡(能矯正光譜中三種色光的色差的物鏡,價格貴,使用少)。
2、物鏡的主要參數(shù):
物鏡主要參數(shù)包括:放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑和工作距離。
①、放大倍數(shù)是指眼睛看到像的大小與對應(yīng)標(biāo)本大小的比值。它指的是長度的比值而不是面積的比值。例:放大倍數(shù)為100×,指的是長度是1μm的標(biāo)本,放大后像的長度是100μm,要是以面積計(jì)算,則放大了10,000倍。
顯微鏡的總放大倍數(shù)等于物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。
②、數(shù)值孔徑也叫鏡口率,簡寫NA 或A,是物鏡和聚光器的主要參數(shù),與顯微鏡的分辨力成正比。干燥物鏡的數(shù)值孔徑為0.05-0.95,油浸物鏡(香柏油)的數(shù)值孔徑為1.25。
③、工作距離是指當(dāng)所觀察的標(biāo)本最清楚時物鏡的前端透鏡下面到標(biāo)本的蓋玻片上面的距離。物鏡的工作距離與物鏡的焦距有關(guān),物鏡的焦距越長,放大倍數(shù)越低,其工作距離越長。例:10倍物鏡上標(biāo)有10/0.25和160/0.17,其中10為物鏡的放大倍數(shù);0.25為數(shù)值孔徑;160為鏡筒長度(單位mm);0.17為蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度(單位 mm)。10倍物鏡有效工作距離為6.5mm,40倍物鏡有效工作距離為0.48mm 。
3、物鏡的作用是將標(biāo)本作第一次放大,它是決定顯微鏡性能的最重要的部件——分辨力的高低。
分辨力也叫分辨率或分辨本領(lǐng)。分辨力的大小是用分辨距離(所能分辨開的兩個物點(diǎn)間的最小距離)的數(shù)值來表示的。在明視距離(25cm)之處,正常人眼所能看清相距0.073mm的兩個物點(diǎn),這個0.073mm的數(shù)值,即為正常人眼的分辨距離。顯微鏡的分辨距離越小,即表示它的分辨力越高,也就是表示它的性能越好。
顯微鏡的分辨力的大小由物鏡的分辨力來決定的,而物鏡的分辨力又是由它的數(shù)值孔徑和照明光線的波長決定的。
當(dāng)用普通的中央照明法(使光線均勻地透過標(biāo)本的明視照明法)時,顯微鏡的分辨距離為d=0.61λ/NA
式中d——物鏡的分辨距離,單位 nm。
λ——照明光線波長,單位 nm。
NA ——物鏡的數(shù)值孔徑
例如油浸物鏡的數(shù)值孔徑為1.25,可見光波長范圍為400—700nm ,取其平均波長550 nm,則d=270 nm,約等于照明光線波長一半。一般地,用可見光照明的顯微鏡分辨力的極限是0.2μm。
添加日期:2009-12-30
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